Научная статья группы авторов «Разработка высокочувствительной пцр тест-системы для детекции вируса лейкоза крупного рогатого скота» опубликована в журнале «Ветеринария Кубани». В составе коллектива авторов исследования академик РАН, член Общественного совета Росатома Ирина Донник (разработка концепции, разработка методологии, научное руководство).
Цель исследования: разработка высокочувствительной тест-системы на основе полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) для детекции провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). С использованием биоинформатических методов (MEGA, UGENE, Primer3) на основе анализа 200 полногеномных последовательностей ВЛКРС были подобраны специфичные праймеры и гидролизный зонд, нацеленные на консервативный регион LTR-области провируса. Работоспособность системы проверялась на ДНК инфицированной клеточной линии FLK. ПЦР-РВ проводили с градиентом температур отжига (56-64°C). Специфичность амплификации контролировали методом электрофореза в агарозном геле.
В результате исследований разработан набор олигонуклеотидов (прямой и обратный праймеры, зонд), обеспечивающий амплификацию специфичного фрагмента длиной 198 п.н. В ходе ПЦР-РВ получены стабильные кривые амплификации во всем диапазоне температур отжига. Электрофоретический анализ подтвердил отсутствие неспецифических продуктов и праймер-димеров.
Таким образом, разработана высокоспецифичная ПЦР-система для прямого выявления провирусной ДНК ВЛКРС. Метод является перспективным инструментом для ранней диагностики инфекции, особенно в случаях низкой провирусной нагрузки, наличия материнских антител у телят и иммунотолерантности животных, когда серологические методы малоинформативны. Для полной валидации системы требуются дальнейшие исследования по оценке аналитической и диагностической чувствительности, специфичности и испытаниям на клинических образцах.